Day & Night urmăreşte două caractere, Ziua şi Noaptea. Înăuntrul Zilei este o scenă de zi cu un soare în centru, iar înăuntrul Nopţii este o scenă de noapte cu o lună în centru. Orice intră înăuntrul Zilei sau Nopţii exprimă evenimente normale care de regulă apar ziua, respectiv noaptea, iar aceste evenimente corespund adesea cu acţiuni sau emoţii pe care caracterele Ziua şi Noaptea le exprimă. De exemplu, când Ziua este fericită, va avea înăuntrul ei un curcubeu, iar când Noaptea este fericită, va avea focuri de artificii în interior.

Ziua şi Noaptea se întâlnesc, iar la început nu se suportă unul pe celălalt. Devin geloşi unul pe altul din cauza evenimentelor care se petrec înăuntrul lor, ajungând să se certe la un moment dat. În cele din urmă, ei văd lucrurile pozitive unul în celălalt şi învaţă să se placă reciproc. La sfârşitul filmului, lucrurile pe care le văd în celălalt, le văd în ei înşişi, pe măsură ce Ziua devine noapte, iar Noaptea devine zi.